07-12
外泌體是一種從細(xì)胞中釋放出來(lái)的小囊泡，存在于各種哺乳動(dòng)物的生物液體中，如牛奶，除了乳制品應(yīng)用外，它已被用于護(hù)膚多年。此外，外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞間通訊的載體。
目的:在本研究中，我們旨在研究牛乳源性外泌體(MK-Exo)在人類皮膚抗衰老中的新作用。
07-12
外泌體負(fù)載的SARS-CoV-2 RBD mRNA在小鼠的十二指腸內(nèi)傳遞誘導(dǎo)了中和抗體反應(yīng)
引起2019冠狀病毒病(COVID-19)的嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型(SARS-CoV-2)給全球健康帶來(lái)了諸多挑戰(zhàn)。包括脂質(zhì)納米顆粒mRNA、滅活病毒和重組蛋白在內(nèi)的疫苗已被用于臨床預(yù)防SARS-CoV-2感染，并在控制大流行方面發(fā)揮了巨大作用。在這里，我們提出并評(píng)估了一種基于牛乳源性外泌體(milk-exos)的口服mRNA疫苗，該疫苗編碼SARS-CoV-2受體結(jié)合域(RBD)作為免疫原。結(jié)果表明，乳源性外泌體傳遞的RBD mRNA可在體外293細(xì)胞中產(chǎn)生分泌的RBD肽，并刺激小鼠抗RBD的中和抗體。這些結(jié)果表明，用牛乳源性外泌體裝載SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗是一種簡(jiǎn)單、廉價(jià)、新穎的在體內(nèi)引入針對(duì)SARS-CoV-2免疫的方法。此外，它還可以作為一種新的mRNA口服遞送系統(tǒng)。
07-12
外泌體作為細(xì)胞間通訊載體參與了許多生物過(guò)程。由于外泌體作為細(xì)胞和基因治療以及藥物遞送應(yīng)用的天然載體被越來(lái)越多地探索，因此擁有高質(zhì)量的樣品至關(guān)重要。蛋白:顆粒比法、ELISA法、western blotting法、聚合酶鏈反應(yīng)法和排粒徑高效液相色譜法是近年來(lái)廣泛應(yīng)用于外泌體純度分析的主要方法。然而，目前還沒(méi)有一種行之有效的方法可以方便地對(duì)外泌體樣品中的小尺寸雜質(zhì)進(jìn)行常規(guī)質(zhì)量分析。本文采用尺寸排除高效液相色譜法(SE-HPLC)、離子交換高效液相色譜法(IEX-HPLC)和新型二維高效液相色譜法(2D-HPLC)對(duì)牛乳源性外泌體的純度進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)不同的外泌體分離工藝進(jìn)行了詳細(xì)的研究。結(jié)果表明，2D-HPLC法能夠提高檢測(cè)外泌體純度的準(zhǔn)確性，具有較高的儀器精度和準(zhǔn)確性，減少了人員誤差和實(shí)驗(yàn)成本，大大縮短了分析時(shí)間，自動(dòng)化程度更高。2D-HPLC方法快速、選擇性高、靈敏度好，適用于外泌體的藥物和毒理學(xué)分析。
07-12
基于外泌體相關(guān)基因的全基因組微擾分析篩選系統(tǒng)
據(jù)報(bào)道，外泌體對(duì)體內(nèi)生理和病理狀態(tài)有重要影響。外泌體作為一種藥物傳遞載體已被廣泛研究，一些外泌體藥物已進(jìn)入臨床研究階段。外泌體的產(chǎn)生、運(yùn)輸和分泌機(jī)制仍有待深入研究。因此，在這里，我們開(kāi)發(fā)了一種新的基于CRISPR uni的基因篩選系統(tǒng)，通過(guò)該系統(tǒng)，我們可以在全基因組范圍內(nèi)揭示外泌體的生物發(fā)生、運(yùn)輸和攝取機(jī)制。該系統(tǒng)由兩部分組成:一部分是基因敲除組件;另一部分是一個(gè)獨(dú)特的分子標(biāo)識(shí)(UMI)標(biāo)記組件，它可以標(biāo)記敲除細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體，其中每個(gè)sgRNA對(duì)應(yīng)一個(gè)特定的UMI。這樣，通過(guò)檢測(cè)外泌體中裝載的UMI，我們可以追蹤敲除基因。在本研究中，我們首先分別使用質(zhì)粒和慢病毒驗(yàn)證了每個(gè)組分的功能。接下來(lái)，我們使用單個(gè)慢病毒模擬慢病毒庫(kù)對(duì)細(xì)胞的感染，以驗(yàn)證篩選系統(tǒng)的功能。
07-12
采用密度離心法純化牛乳外泌體，研究其對(duì)皮膚屏障的影響。TEM、nanoFCM、Western-blot、LC-MS和BCA檢測(cè)表明，所獲得的牛乳外泌體為高純度的外泌體產(chǎn)物，其外觀、粒度和標(biāo)記物符合牛乳外泌體的典型特征液。然后使用蛋白質(zhì)組學(xué)。結(jié)果表明，牛奶外泌體有助于細(xì)胞間的粘附，表明其具有皮膚屏障修復(fù)的作用。然后將HaCat細(xì)胞與牛乳外泌體孵育，細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)分析證實(shí)，在所有劑量下，牛乳外泌體都上調(diào)了緊密連接蛋白Claudin-1和Claudin-6，下調(diào)了PPP2R1A和PPP2R2A等負(fù)調(diào)控因子。與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果相一致的分子分析表明，Claudin-1在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上均上調(diào)。然后用熒光染料標(biāo)記牛乳外泌體并局部涂于小鼠皮膚上。用熒光共聚焦顯微鏡觀察了標(biāo)記的牛乳外泌體的表皮痕跡。免疫組化檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)，Claudin-1外用小鼠皮膚48小時(shí)后增強(qiáng)。
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07-12
乳外泌體(MK-exo)對(duì)消費(fèi)者的健康具有生物活性，是一種優(yōu)良的藥物傳遞載體。然而，長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸仍然是目前的主要挑戰(zhàn)。本報(bào)告大規(guī)模制備了高質(zhì)量的MK-exo。然后，我們開(kāi)發(fā)了一種屬于MK-exo的凍干方法，并對(duì)凍干后的MK-exo進(jìn)行了加速和長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，以評(píng)估凍干的效果。結(jié)果表明，MK-exo凍干后可在室溫下保存至少3個(gè)月，在2-8℃下保存15個(gè)月。這些發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步了解MK-exo的性質(zhì)和應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)支持。